Lumiprobe抗體標記試劑盒用于制備每個抗體具有2.5-3個標簽的標記抗體。試劑盒包含用于10個標記反應的所有試劑和材料,每個反應100 ug抗體。染料是一種NHS酯,過量服用。在弱堿性pH下,它與抗體的賴氨酸胺基反應。抗體的純化通過使用旋轉柱的凝膠過濾實現。這些試劑盒含有磺化水溶性染料,適合標記敏感蛋白質,包括抗體。
Lumiprobe Lumiprobe 專業提供分子生物學研究用的活性熒光染料。覆蓋領域有:活性染料(ReactiveDye)和SYBRGreen I染料,定制合成熒光雙標記引物。主要應用:點擊化學(CLickChemistry)、蛋白質組學研究中的雙向熒光差異凝膠電泳(2DDIGE)和實時熒光定量PCR(ReaLtimePCR)。
接下來給大家介紹一下Lumiprobe /艾美捷 抗體標記試劑盒的相關內容:
1.抗體制備 標記反應的佳條件如下:濃度為1 mg/mL的抗體溶解在0.1 M碳酸氫鈉溶液中。疊氮化鈉與標簽相容。如果抗體濃度低于1 mg/mL,則應進行濃縮??贵w制備應不含氨基酸、蛋白質(如BSA)和緩沖成分,這些成分會使pH值處于不利(2-7.5或9-12)范圍。
2.建立反應 2.1. 向熒光團、旋渦中添加碳酸氫鈉抗體溶液(100微克/100微升*),并在室溫下培養30分鐘。 *如果要標記少量抗體,將凍干染料溶解在10微升無水二甲基亞砜中,每10微克抗體取1微升溶液。應立即消耗DMSO中的染料溶液。
3.標記抗體的純化 3.1. 準備專欄。使用前,色譜柱應在室溫下。應使用漩渦重新懸浮凝膠。將色譜柱放入廢物容器(無蓋),并在1000 g下離心2分鐘(必須小心控制速度-對于標準6 cm轉子,1000 g=3800 rpm)。立柱的小凸起應朝外。 3.2. 應用400微升1x PBS緩沖液,以1000 g離心2分鐘。 3.3. 從廢物容器上拆下柱。將其放入收集管(帶蓋)。將100微升反應混合物施加到柱上,培養1分鐘,并通過離心以1000 g的速度洗脫抗體2分鐘。添加1/100體積的100倍疊氮化鈉??贵w可以等分以提高其保存期。當前等分試樣可儲存在+4°С的溫度下,其余等分試樣可儲存在+4°С的溫度下−20 °С.
4.染料與抗體比率的測量 為了計算染料與抗體的比率,測量共軛物的吸收光譜,或在280 nm(AAB)和染料吸收大值(ADye)處的吸收。染料標記抗體的典型吸收光譜如下所示。根據染料的不同,大波長可能會有所不同。
Lumiprobe 部分研究工具: cat# 名稱 規格 11030 Cy3 azide 100ul 12030 Cy3.5 azide 100ul 13030 Cy5 azide 100ul 14030 Cy5.5 azide 100ul 14130 FAM azide,5-isomer, 100ul 11130 JOE azide,5-isomer 100ul 14230 R110 azide,5-isomer 100ul 12230 ROX azide,6-isomer 100ul 17130 TAMRA azide, 5-isomer 100ul 33720 Azidobutyric acid NHS ester 100ul
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